Membuat Kultur Jaringan Menggunakan Media PDA (Potatoes Dextrose Agar)

Pembuatan Kultur Jaringan

Alat dan Bahan

• Botol berisi PDA
• Pinset
• Pisau scalpel
• Jarum jara
• Lampu spirtus
• Alkohol 70%
• Kapas
• Ruang isolasi / laminar Flow
• Jamur tiram
• Pemantik api
• Label + spidol
• Lampu ultraviolet yang dipasang di ruang isolasi/laminar Flow

Proses Pembuatan

• 1. Pilih jamur yang baik dengan ciri-ciri
     • sehat (bersih, tidak busuk ataupun terkontaminasi hama atau jamur pengganggu),
     • memiliki batang yang kuat,
     • tidak terlalu tua artinya masih dalam masa pertumbuhan, bisa dilihat dari tudungnya yang belum terlalu besar,
     • jamur yang dipilih merupakan jamur yang tumbuhnya tunggal (satu tangkai) tidak berkoloni (memiliki banyak tangkai)

• 1. Bersihkan ruangan isolasi dan semua peralatan dengan menggunakan alkohol kemudian masukkan semua peralatan yang telah dibersihkan ke dalam ruang isolasi
  2. Nyalakan lampu UV di dalam ruang isolasi/laminar flow selama 10-15 menit, setelah itu matikan. Lampu UV berfungsi untuk mematikan bakteri-bakteri kontaminan
  3. Setelah peralatan siap, bersihkan kedua tangan dan botol-botol PDA dengan alkohol
  4. Masukkan kedua tangan ke dalam ruang isolasi kemudian pegang pisau skalpel/jarum jara seperti memegang sendok.
  5. bakar ujung  jarum jara tersebut beberapa saat dengan menggunakan lampu spirtus untuk membunuh kuman-kuman yang masih menempel. Pastikan jarum jara tidak menyentuh permukaan setelah pembakaran
  6. Setelah jarum dingin, siapkan bagian kecil  jamur yang akan dikultur dengan cara menyobeknya menggunakan tangan
  7. Potong jaringan dari dalam jamur dengan menggunakan jarum jara/pisau scalpel dengan ukuran 2 mm x 2 mm. Jaringan  yang dipotong kira kira terletak pada bagian tengah antara tudung buah dan batang.
  8. Siapkan botol PDA. Dekatkan dengan api untuk menjaga dari kontaminasi (± 20 cm). Buka kapas penutup botol
  9. secara perlahan lahan masukkan/inokulasi jaringan jamur yang telah dipotong dengan menggunakan jarum jara/pinset ke bagian tengah permukaan PDA.
  10. Setelah selesai tutup botol PDA segera dengan menggunakan kapas
  11. Beri label pada botol PDA dengan menuliskan keterangan-keterangan yang diperlukan seperti tanggal inokulasi,jenis jamur dll.
  12. simpan/inkubasi di tempat yang bersih
  13. lakukan pengamatan secara berkala. Bila terdapat kontaminasi segera pisahkan dan bersihkan.
  14. Setelah miselium memenuhi isi botol (2-4 minggu masa inkubasi) maka miselium siap digunakan untuk membuat bibit F1/turunan pertama. Apabila tidak langsung digunakan, botol-botol berisi miselium ini bisa diawetkan dengan menyimpannya di tempat yang dingin/lemari pendingin